激光共聚焦顯微鏡以激光作為光源。樣品被放置在載物臺上，由激光器發(fā)出的激光束通過物鏡準(zhǔn)確地聚焦在樣品表面的特定點。如果樣品中有熒光物質(zhì)，該點的熒光物質(zhì)會受到激光的激發(fā)而產(chǎn)生熒光信號。
針孔過濾：在探測器前設(shè)置了一個針孔裝置，這是其關(guān)鍵技術(shù)之一。只有來自焦平面上的熒光信號能夠通過這個針孔到達(dá)探測器，而焦平面以外的散射光、雜散光等模糊背景光則會被針孔阻擋掉。這種設(shè)計有效地排除了非焦平面光線的干擾，大大提高了成像的清晰度和對比度。
掃描成像：通過對樣品進行逐點掃描的方式，收集不同位置的熒光信息。隨著掃描過程的進行，可以獲取一系列二維光學(xué)橫斷面圖像。計算機系統(tǒng)對這些圖像進行處理和整合，能夠重構(gòu)出樣品的三維結(jié)構(gòu)模型，實現(xiàn)對樣品內(nèi)部的觀察和分析。
激光共聚焦顯微鏡的使用注意事項：
1.操作規(guī)范方面
-嚴(yán)格遵循規(guī)程：必須嚴(yán)格按照設(shè)備的使用規(guī)則操作，不得隨意更改操作程序。
-保護激光管：激光發(fā)射管使用壽命有限且價格昂貴，在開關(guān)機順序以及掃描過程中都要注意對其加以保護。
2.安全防護方面
-防止激光傷害：小心不要接觸中等功率和高功率的激光輻射。切勿將布或紙等易燃材料放在光路中，也不要在共焦顯微鏡附近存放或使用易燃、易爆物質(zhì)。
-環(huán)境要求：設(shè)備應(yīng)放置在穩(wěn)固、干燥、通風(fēng)良好的環(huán)境中，遠(yuǎn)離有潮濕氣氛或者有化學(xué)氣味的區(qū)域。
3.樣品處理方面
-固定樣品：對于生物樣品，常用甲醛、戊二醛等固定劑進行固定，以防止樣品在后續(xù)處理過程中發(fā)生降解或變形。
-控制環(huán)境穩(wěn)定性：若進行活細(xì)胞成像，需要穩(wěn)定的溫控環(huán)境。應(yīng)提前打開溫控設(shè)備，確保溫度、二氧化碳濃度和濕度等條件符合細(xì)胞生長要求；同時，長時間成像過程中要避免外界干擾，如震動、氣流等。
4.日常維護方面
-清潔保養(yǎng)：使用完畢后，要及時清洗載物臺，并用干凈柔軟的毛巾擦拭顯微鏡外部，防止灰塵堆積。定期檢查設(shè)備各部件是否正常，如有異常應(yīng)及時聯(lián)系專業(yè)人員維修。
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更新時間：2025-10-28 
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